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細(xì)胞爬片是一種將細(xì)胞培養(yǎng)在玻璃或塑料表面上，使其附著并擴(kuò)展的技術(shù)。一般是讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，使細(xì)胞在玻片上生長。這種技術(shù)可以用于觀察細(xì)胞形態(tài)、運動、細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用等。利用細(xì)胞爬片進(jìn)行體外實驗可排除體內(nèi)諸多干擾因素的影響，方便對細(xì)胞進(jìn)行各種干預(yù)處理。
我們在做免疫熒光（IF）、原位雜交（FISH）、凋亡檢測（TUNEL）等實驗時，都需要制備細(xì)胞爬片，而爬片質(zhì)量會影響到最后的圖片呈現(xiàn)效果以及實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了細(xì)胞爬片的制作步驟及注意事項，幫助您快速上手開展實驗。
操作步驟
01
爬片準(zhǔn)備
1
根據(jù)實驗選擇合適大小的爬片。
2
爬片處理，首先浸酸：5%稀鹽酸浸泡過夜（最好逐片浸入，多片同時浸入會引起多片粘連、浸洗不充分），第二天先用自來水沖洗20次，再用三蒸水沖洗2次（清除殘留酸液）。
3
將爬片置于無水乙醇浸泡過夜（浸洗脂類污漬），75%乙醇長期保存?zhèn)溆?span style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important; color: rgba(78, 77, 77, 0.69);">（無需高壓滅菌）。使用時鑷子取出爬片，酒精燈烘烤，放入孔板。
02
細(xì)胞爬片
1
收集貼壁細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，按照實驗需求用完-全培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞至合適濃度。
2
加細(xì)胞前，先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴加少量培養(yǎng)基（目的是使爬片與培養(yǎng)皿靠液體的張力粘合到一起），然后輕放爬片（注意不要產(chǎn)生氣泡，防止加細(xì)胞懸液時爬片漂起）。整個過程注意無菌操作。
3
根據(jù)實驗需求接種合適細(xì)胞量到培養(yǎng)器皿內(nèi)。
03
爬片的固定
固定液的選擇：
以多聚甲醛為例進(jìn)行固定：
1
準(zhǔn)備4%多聚甲醛（PFA），于4℃冰箱中保存，使用時常溫復(fù)溫。
2
在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的爬片用PBS浸洗3次，每次3 min，輕輕晃動，避免將細(xì)胞沖掉。
3
用4%的多聚甲醛固定爬片15 min（細(xì)胞自帶熒光時注意避光），PBS浸洗爬片3次，每次3 min。
4
Triton X-100（PBS配制，濃度根據(jù)實驗調(diào)整）室溫通透20 min。
5
PBS浸洗爬片3次，每次3 min。
6
按實驗需求進(jìn)行后續(xù)實驗。
04
細(xì)胞爬片封片
封片前根據(jù)實驗需求決定是否需要孵育抗體或復(fù)染核。孵育好后用PBS浸洗3次，用吸水紙吸干爬片上的液體，封片液封片。
注意事項
注：各個實驗室的操作流程都各有差異。此方案是我們實踐驗證可行的方案。
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