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細胞學堂|MEG-01培養(yǎng)注意事項

更新時間:2023-06-30  |  點擊率:1262



基本信息

1

細胞名稱

MEG-01 (人成巨核細胞白血病細胞)

2

別名

Meg-01; MEG01; Meg01

3

細胞培養(yǎng)條件

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S,37℃;5% CO2

4

生長特性

半貼半懸 

5

細胞形態(tài)

淋巴母細胞樣



背景資料


MEG-01是一種巨核母細胞系,該細胞來自于一名費城染色體(Ph)陽性的慢性粒細胞性白血病(CML)患者。1983年由Michinori Ogura, Yasuo Morishima等人從一名55歲患有慢性粒細胞性白血病(CML)且處于CML爆發(fā)危機的男性的骨髓樣本中提取。


MEG-01細胞沒懸浮的細胞大多為圓形或者卵圓形,貼壁的細胞會伸出偽足。細胞質相對嗜堿性,并含有少量空泡,還觀察到細胞質突起。單克隆抗體的間接免疫熒光試驗顯示,MEG-01細胞表面的FVIII相關抗原呈陰性,該抗原在MEG-01細胞特別是大細胞的細胞質中呈陽性。所有細胞均呈彌漫性和細顆粒狀的酸性磷酸酶強陽性。


MEG-01不僅為研究人類巨核細胞分化和成熟提供研究模型,而且為血小板或蛋白質如FVIII相關抗原、血小板糖蛋白或血小板衍生生長因子(PDGF)等的產生和釋放提供一種有用的研究模型。


細胞特性

培養(yǎng)中始終存在一些黑點樣碎片,不需要特殊處理。大部分細胞呈不規(guī)則圓形懸浮狀態(tài),有少量細胞呈梭形貼壁。


培養(yǎng)方法


以T25瓶為例

1

該細胞為半貼壁半懸浮細胞,其中貼壁細胞較少或到50%均為正常,可以按懸浮細胞的培養(yǎng)方式傳代,貼壁部分吹下即可(如遇吹不下來,可用0.25%胰酶適當消化);

2

維持細胞密度在3-10×105cells/mL培養(yǎng),初始接種密度不低于3×105cells/mL,長到10×105cells/mL左右進行傳代。建議前期計數后操作,后面可以根據經驗傳代;

3

每隔3天計數操作一次,如密度低于3×105cells/mL可更換小體積容器(如孔板)進行培養(yǎng);

4

根據細胞密度選擇其中一種操作方法:


方法一


半換液。如密度不足8×105cells/mL則進行半換液;緩緩吸出上層一半的培養(yǎng)液,于1200 rpm(250g左右) 3min離心收集細胞,加入等體積新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,輕輕吹打3-5次,接回原瓶繼續(xù)培養(yǎng);


方法二


1:2稀釋傳代。如密度接近10×105cells/mL左右,則將細胞等體積分裝到兩個新培養(yǎng)瓶,每瓶分別補加新鮮培養(yǎng)基到總體積5mL;


方法三


全離心換液或傳代。細胞每持續(xù)培養(yǎng)超一周可進行一次全離心換液或者傳代,不建議頻繁用離心的方式換液或傳代;離心轉速推薦1200rpm 3min。


特殊注意事項

01


該細胞增殖較慢,比較脆弱,培養(yǎng)中減少觀察挪動,維持穩(wěn)定的培養(yǎng)溫度和環(huán)境;

02


盡可能減少吹打次數,取樣計數或者傳代時輕輕吹打3-5下混勻細胞即可;

03


傳代后每天觀察細胞狀態(tài),如果密度太大,不及時處理,細胞容易死亡,需嚴格控制培養(yǎng)密度;

04


至少每3天需要將細胞半換液或者傳代一次,一周左右全部離心換液一次。


凍存與復蘇

推薦凍存密度:


3~5×106 cells/mL ;


凍存液配比:


55% RPMI-1640 +40% FBS+5%DMSO,需使用程序凍存盒梯度降溫凍存。


生長圖片

圖片

圖1:建系文檔中的MEG-01細胞圖


圖片

圖2:ATCC培養(yǎng)圖,來源于ATCC


圖片

圖3:普諾賽培養(yǎng)圖




參考文獻:


[1] Ogura M, et al. Establishment of a novel human megakaryoblastic leukemia cell line, MEG- 01, with positive Philadelphia chromosome. Blood 66: 1384-1392, 1985. PubMed: 2998511






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